安捷伦疑难杂症攻克系列 | 液相色谱柱柱压高，对症下药

柱压高是液相色谱分析工作者最常遇到的“病症”，随着进样针数的增加，您的色谱柱压力是否一路飙升？

想要有效“治疗”柱高压，只从色谱柱本身找寻原因可不行的。我们需要全面分析可能导致高柱压的因素，按图索骥，找到症结所在，一击即中攻克高柱压。为了更好的探明真相，我们进行了一系列的模拟测试（图1-2）发现，样品及流动相中的固体微粒、不合理的样品前处理才是罪魁祸首。

找到症结所在，如何对症下药？我们来给您支招！

图 1. 未过滤或过滤 0.3μm 的乳胶珠（ 0.05% 原液）的进样次数：未过滤的样品在不到 100 针的进样过程之后，色谱柱的压力就飙升到 1000bar，而过滤的样品压力一直平稳

图 2. 蛋白沉淀后未过滤、离心或过滤的人血浆的进样次数：过滤的压力在 1000 针进样后没有明显上升

良好的溶剂管理至关重要

首先，保持流动相洁净

目的：水相缓冲液必须过滤，去除缓冲盐未溶微粒，同时进行脱气

周期：流动相需每天配置，结合滤膜进行过滤

选择：常用滤膜为再生纤维素滤膜 47mm，孔径 0.45μm 孔径，部件号 5191-4337

其次，保持流动相密闭

目的：避免流动相暴露于空气，进入微粒，同时防止长菌

选择：流动相安全瓶盖+避光棕色溶剂瓶

最后，注意溶剂入口过滤

目的：水相流动相放置容易滋生微生物，低品质有机溶剂存在杂质颗粒，因此在流动相进入系统时务必要先过滤

周期：溶剂入口过滤器推荐 3-6 个月更换一次；如果过滤器更换不及时，过滤器将部分堵塞，则仅有极少量溶剂从溶剂管滴出，严重影响分析结果

选择：LC/MS 其流速小，选择孔径 10μm 的不锈钢过滤器，可达到更佳的过滤效率；一般分析则使用 20μm 玻璃过滤器即可满足需求

合理前处理和过滤尤其有效

合理的前处理减少污染物的引入

有效的样品过滤

安捷伦提供不同材质的针式过滤头以供不同溶剂的选择需要。

配置在线过滤器或保护柱

1. 在线过滤器滤除杂质，新品推荐

目的：去除来自样品、流动相盐结晶及流路耗材磨损带来的微粒污染物；尤其小颗粒色谱柱或复杂基质的样品，更需要柱前过滤，防止色谱柱堵塞

周期：1000 次进样或背压上升 15% 时更换滤芯

选择：根据 HPLC 或 UHPLC 选择不同内径和孔径的在线过滤器

2. 保护柱

目的：去除来自样品的微粒污染物，同时吸附来自于样品中的强保留的化学污染物

周期：理论塔板数、压力或分离度的改变超过 10% 时，更换保护柱

选择：为保持对样品杂质有足够的容量，应选择内径与色谱柱内径相似的保护柱

正确色谱柱冲洗有助于延长色谱柱寿命

安捷伦 2μm 的常规反相色谱柱是可以进行反冲的，反冲可以帮助污染物快速流出柱子，缩短冲洗时间。

冲洗溶剂的顺序

90% 水相 / 甲醇或乙腈 → 100% 甲醇 → 100% 乙腈 → 100% 异丙醇 → 100% 甲醇或乙腈。